Sól fizjologiczna buforowana fosforanem lub roztwór PBS
Jak przygotować roztwór soli fizjologicznej buforowany fosforanem?
Sól fizjologiczna buforowana fosforanem lub PBS jest izotoniczna dla płynów ustrojowych człowieka. Eugenio Marongiu / Getty Images
PBS lub buforowany fosforanem sól fizjologiczna jest roztwór buforowy jest to szczególnie cenne, ponieważ naśladuje stężenie jonów, osmolarność i pH płynów ustrojowych człowieka. Innymi słowy, jest izotoniczny dla ludzkich roztworów, więc jest mniej prawdopodobne, że spowoduje uszkodzenie komórek, toksyczność lub niepożądane wytrącanie w badaniach biologicznych, medycznych lub biochemicznych.
Skład chemiczny PBS
Istnieje kilka przepisów na przygotowanie roztworu PBS. Podstawowy roztwór zawiera wodę, wodorofosforan sodu i chlorek sodu . Niektóre preparaty zawierają chlorek potasu i diwodorofosforan potasu. EDTA można również dodać do preparatów komórkowych, aby zapobiec zlepianiu.
Sól fizjologiczna buforowana fosforanami nie jest idealna do stosowania w roztworach to zawiera kationy dwuwartościowe (Wiara2+, Zn2+), ponieważ mogą wystąpić opady. Jednak niektóre roztwory PBS zawierają wapń lub magnez. Należy również pamiętać, że fosforany mogą hamować reakcje enzymatyczne. Bądź szczególnie świadomy tej potencjalnej wady podczas pracy z DNA. Chociaż PBS doskonale nadaje się do nauki fizjologicznej, należy pamiętać, że fosforan w próbce buforowanej PBS może wytrącić się, jeśli próbka zostanie zmieszana z etanolem.
Typowy skład chemiczny 1X PBS ma końcowe stężenie 10 mM PO43-, 137 mM NaCI i 2,7 mM KCI. Oto końcowe stężenie odczynników w roztworze:
| Sól | Stężenie (mmol/L) | Stężenie (g/l) |
|---|---|---|
| NaCl | 137 | 8,0 |
| KCl .Name | 2,7 | 0,2 |
| JużdwaHPO4 | 10 | 1,42 |
| KHdwaPO4 | 1,8 | 0,24 |
Protokół wytwarzania soli fizjologicznej buforowanej fosforanem
W zależności od celu możesz przygotować 1X, 5X lub 10X PBS. Wiele osób po prostu kupuje tabletki buforowe PBS, rozpuszcza je w wodzie destylowanej i dostosowuje pH w razie potrzeby z kwasem solnym lub wodorotlenek sodu . Jednak łatwo jest stworzyć rozwiązanie od podstaw. Oto przepisy na 1X i 10X soli fizjologicznej buforowanej fosforanami:
Odczynnik | Kwota dodać (1×) | Stężenie końcowe (1×) | Kwota do dodania (10×) | Stężenie końcowe (10×) |
| NaCl | 8 gramów | 137 mM | 80 gramów | 1,37 mln |
| KCl .Name | 0,2 g | 2,7 mM | 2 gramy | 27 mM |
| Na2HPO4 | 1,44 grama | 10 mM | 14,4 g | 100 mM |
| KH2PO4 | 0,24 grama | 1,8 mM | 2,4 grama | 18 mM |
Opcjonalny: | ||||
| CaCl2•2H2O | 0,133 g | 1 mM | 1,33 grama | 10 mM |
MgCl2•6H2O | 0,10 g | 0,5 mM | 1,0 g | 5 mM |
- Rozpuść sole odczynników w 800 ml wody destylowanej.
- Dostosuj pH do pożądanego poziomu kwasem solnym. Zwykle jest to 7,4 lub 7,2. Do pomiaru pH użyj miernika pH, a nie papierka do pomiaru pH lub innej nieprecyzyjnej techniki.
- Dodaj wodę destylowaną, aby uzyskać końcową objętość 1 litra.
Sterylizacja i przechowywanie roztworu PBS
W przypadku niektórych zastosowań sterylizacja nie jest konieczna, ale jeśli ją sterylizujesz, rozprowadź roztwór na porcje i autoklawuj przez 20 minut pod ciśnieniem 15 psi (1,05 kg/cm).dwa) lub użyć sterylizacji filtracyjnej.
Sól fizjologiczna buforowana fosforanami może być przechowywane w temperaturze pokojowej . Może być również przechowywany w lodówce, ale rozwiązanie 5X i 10X może wytrąca się po ostygnięciu . Jeśli musisz schłodzić stężony roztwór, najpierw przechowuj go w temperaturze pokojowej, aż będziesz mieć pewność, że sole całkowicie się rozpuszczą. Jeśli wystąpią opady, podgrzanie temperatury przywróci je do roztworu. Okres ważności roztworu w lodówce wynosi 1 miesiąc.
Rozcieńczanie rozwiązania 10X w celu uzyskania 1X PBS
10X to stężony lub podstawowy roztwór, który można rozcieńczyć do roztworu 1X lub normalnego. Roztwór 5X należy rozcieńczyć 5 razy, aby uzyskać normalne rozcieńczenie, podczas gdy roztwór 10X należy rozcieńczyć 10 razy.
Aby przygotować 1 litrowy roztwór roboczy 1X PBS z roztworu 10X PBS, dodaj 100 ml roztworu 10X do 900 ml wody. Zmienia to tylko stężenie roztworu, a nie gramową lub molową ilość odczynników. Wartość pH powinna być nienaruszona.
PBS kontra DPBS
Innym popularnym roztworem buforowym jest sól fizjologiczna buforowana fosforanami Dulbecco lub DPBS. DPBS, podobnie jak PBS, jest używany do badań biologicznych i buforów w zakresie pH od 7,2 do 7,6. Może być przechowywany w temperaturze pokojowej. Roztwór Dulbecco zawiera niższe stężenie fosforanów. Jest to 8,1 mM mM jony fosforanowe, podczas gdy zwykły PBS to 10 mM fosforan. Przepis na 1x DPBS to:
| Odczynnik | Kwota do dodania (1x) |
| NaCl | 8.007 g |
| KCl .Name | 0,201 g |
| JużdwaHPO4 | 1.150g |
| KHdwaPO4 | 0,200 g |
| Opcjonalny: | |
| CaCldwa•2HdwaO | 0,133 g |
| MgCldwa•6HdwaO | 0,102 g |
Rozpuść sole w 800 ml wody. Doprowadzić pH do 7,2 do 76 za pomocą kwasu chlorowodorowego. Dostosuj końcową objętość do 1000 ml wodą. Autoklawować w 121°C przez 20 minut.
Źródła
- Dulbecco, R.; i in. (1954). ' Tworzenie płytki nazębnej i izolacja czystych linii z wirusami poliomyelitis „. J. Eksp. Z. 99(2): 167–182.
- „Sól fizjologiczna buforowana fosforanem (PBS.” Protokoły Cold Spring Harbor (2006). Cold Spring Harbor Laboratory Press.