Jak zrobić sól fizjologiczną buforowaną fosforanem (PBS)
WALTER ZERLA/Getty Images
Sól fizjologiczna buforowana fosforanem (PBS) jest roztwór buforowy który jest powszechnie używany do barwienia immunohistochemicznego (IHC) i jest często używany w badaniach biologicznych. PBS jest wodnym roztworem soli zawierającym wodorofosforan sodu, chlorek sodu oraz, w niektórych przypadkach, chlorek potasu i diwodorofosforan potasu.
Barwienie immunohistochemiczne
Immunohistochemia odnosi się do procesu wykrywania antygenów, takich jak białka, w komórkach wycinków tkankowych przy użyciu zasady przeciwciał wiążących się specyficznie z antygenami w tkankach biologicznych. Barwienie immunofluorescencyjne było pierwszą metodą barwienia immunohistochemicznego.
Antygeny stają się widoczne po sprzężeniu z przeciwciałami przy użyciu barwników fluorescencyjnych w wyniku reakcji wiązania antygen-przeciwciało. Proces ten zachodzi, gdy jest aktywowany przez ekscytujące światło o określonej długości fali pod mikroskopem fluorescencyjnym.
Osmolarność i stężenie jonów w roztworach odpowiadają tym w ludzkim ciele – są izotoniczne.
Przepis na bufor PBS
PBS można przygotować na kilka sposobów. Istnieje wiele formuł. Niektóre z nich nie zawierają potasu, inne zawierają wapń lub magnez .
Ten przepis jest stosunkowo łatwy. Jest przeznaczony do roztworu podstawowego 10X PBS (0,1M). Możesz jednak również przygotować roztwór podstawowy 1X lub zacząć od tego przepisu 10X i rozcieńczyć go do 1X. Cały proces trwa około 10 minut i dostępna jest również opcja dodania Tween.
Czego potrzebujesz, aby zrobić bufor PBS
- Fosforan sodu jednozasadowy (bezwodny)
- Dwuzasadowy fosforan sodu (bezwodny)
- Chlorek sodu
- Wagi i łodzie do ważenia
- Mieszadło magnetyczne i mieszadło
- Skalibrowana sonda pH i odpowiednie roztwory do regulacji pH
- Kolba miarowa 1L
- Tween 20 (opcjonalnie)
Jak zrobić bufor PBS
- Odważyć 10,9 g bezwodnego dwuzasadowego fosforanu sodu (Na2HPO4), 3,2 g bezwodnego jednozasadowego fosforanu sodu (NaH2PO4) i 90 g chlorku sodu (NaCl). Rozpuść w prawie 1 litrze wody destylowanej.
- Dostosuj pH do 7,4 i uzupełnij roztwór do końcowej objętości 1 l.
- Rozcieńczyć 10X przed użyciem i w razie potrzeby skorygować pH.
- Możesz przygotować roztwór PBS zawierający 0,5% Tween 20, dodając 5 ml Tween 20 do 1 l roztworu.
Wskazówki dotyczące tworzenia bufora PBS
Po przygotowaniu roztworu PBS przechowuj bufor w temperaturze pokojowej.
Odczynniki niebezwodne można zastąpić, ale trzeba będzie ponownie obliczyć odpowiednią masę każdego z nich, aby pomieścić dodane cząsteczki wody.
Zastosowania bufora PBS
Sól fizjologiczna buforowana fosforanami ma wiele zastosowań, ponieważ jest izotoniczna i nietoksyczna dla większości komórek. Może być używany do rozcieńczania substancji i jest często używany do płukania pojemników z komórkami. PBS może być używany jako rozcieńczalnik w różnych metodach suszenia biomolekuł, ponieważ zawarte w nim cząsteczki wody będą ustrukturyzowane wokół substancji – na przykład białka. Zostanie „wysuszony” i unieruchomiony na twardej powierzchni.
pH pozostaje stałe i stałe, aby zapobiec niszczeniu komórek.
Cienka warstwa wody, która wiąże się z substancją, zapobiega denaturacji lub innym zmianom konformacyjnym. Bufory węglanowe mogą być używane w tym samym celu, ale z mniejszą skutecznością.
PBS można również wykorzystać do pobrania widma referencyjnego podczas pomiaru białko adsorpcja w elipsometrii.